樣本處理及要求：

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

二.   96T試劑盒組成及其配置：人鉤端螺旋體抗體(Lep-Ab)ELISA檢測試劑盒

①微孔酶標(biāo)板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對照 0.5mL；

③陽性對照 0.5mL；

④檢測抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說明書 1 份；自封袋 1 個.

備注：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

三.   使用注意事項：

1. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，加熱使結(jié)晶溶解后再配制。

2. 底物液使用前建議先行檢查，若溶液顏色發(fā)藍(lán)則已失效，棄去。

3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最佳檢測效果。4. 本嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 板條開封后剩余板條要密封好，保持板條干燥。

6. 不同批號的試劑盒組分不能混用。7.正確拿酶標(biāo)板：不要接觸板的底部，否則會影響度數(shù)。

四. 人鉤端螺旋體抗體(Lep-Ab)ELISA檢測試劑盒結(jié)果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

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